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青霉素殘留elisa試劑盒操作流程

更新時間：2020-06-11 點擊次數：1901次

　　青霉素殘留elisa試劑盒可用于定性、定量檢測動物組織（肌肉、肝臟、魚、蝦等）、蜂蜜、牛奶、奶粉、冰淇淋、奶油和疫苗樣本中青霉素的殘留量。

　　試驗原理：本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在酶標板微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中殘留的青霉素和酶標板微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗青霉素的抗體，加入酶標二抗后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物青霉素的含量成負相關，與標準曲線比較，再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣本中青霉素的殘留量。

　　青霉素殘留elisa試劑盒操作流程如下：

　　（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　（2）酶標板置4℃，包被過夜。

　　（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

　　（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　　（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

　　（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

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